가오갤2 다운로드

갈락토오스 및 갈2의 Tyr352 돌연변이를 발현하는 세포의 포도당 수송 활동. LBY416 세포는 Tyr352가 각각 다른 19개의 아미노산으로 대체된 야생형 Gal2 또는 Gal2 돌연변이를 인코딩하는 플라스미드를 항재하여 상에 배양하였다. 0.1 mm 갈락토오스(솔리드 바) 또는 0.1 mm 포도당(해치 바)의 수송을 측정하였다. pTV3e를 품고 있는 대조군 세포의 수송 활성을 빼낸 후(2.0±0.1 및 5.8±0.3 pmol/107 세포/5s(±S.E., n=4) 각각 갈락토오스 및 포도당에 대해, 실험 세포에서의 수송 활성은 야생형 Gal2를 발현하는 세포의 백분율로 발현되었다(15.7±0.8 및 26.5±1.6 pmol/107 세포/5s(n=4)) 각각 갈락토오스 및 포도당에 대해). 데이터는 ±S.E. (n ≥ 3)을 의미한다. >10%의 값은 유의한 것으로 간주되었다(9). 초기 지수 내지 중간집식 상에서 살아있는 세포는 필터 큐브 L5를 구비한 에피플루오레스 현미경(DMR, 라이카)으로 조사하였다. 현미경 사진은 필름 (T-MAX p3200, 코닥)에 기록되고 어도비 포토샵과 캔버스 (데네바 소프트웨어)와 함께 디스플레이를 위해 처리되었다. 개별 세포의 형광 강도가 이전에 언급된 바와 같이 이질적인 것으로 관찰되었다(18, 19), 대표적인 세포는 여기에 도면에서 도시되어 있다. 대조군으로서, ANS6-2D(MATα sec6-4 ura3-52 leu2-3, 112 trp1-289 his3/4)를 사용하여 Gal2-GFP가 혈장 막에 국한되어 있는지 확인하였다.

제한 온도에서, sec6 세포의 분비 소포는 세포질 (20)에 축적된다. DOMO 데이터 베이스(15)에서 63개의 당 수송기 및 당 수송기 관련 단백질(DM00135)의 아미노산 서열을 정렬한 결과, 23개 부위에 단백질의 50%에 방향족 잔류물이 함유되어 있음을 밝혀냈습니다(도 1). 이 사이트의 14 단백질의 75%에 있는 방향족 아미노산을 포함했습니다 (그림 2). 이 14개 사이트 중 하나인 Tyr446은 이미 Gal2(8)에 의한 갈락토스 수송에 필수적인 것으로 확인되었기 때문에, 우리는 본 연구에서 나머지 13개 사이트를 조사했습니다. 포유류 Glut1에서 Trp의 역할은 광활성화 후 단백질의 하나 이상의 Trp 잔류물을 공유적으로 결합하는 이 수송기의 강력한 억제제인 시토칼라신 B의 사용으로 조사되었습니다. Glut1의 6개의 Trp 잔류물 중 2개는 수송 활동(31-33)에 중요한 것으로 나타났다. Putative TM11에서 Trp412의 치환은 현저하게 포도당 수송 활동을 감소시켰고, 반면 Trp388을 putative TM10에서 치환하는 것은 활동의 감소를 덜 뚜렷하게 감소시켰다. 두 Trp 잔기의 치환은 시토샬라신 B에 의한 공유라벨링의 완전한 손실을 초래하지만 시토칼라신 B 결합 또는 포도당 수송 활성의 완전한 억제를 초래하지 않았다; 이 잔류물의 정확한 역할은 이렇게 불분명하게 남아 있었다 (34).

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